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PCR實驗室 , 或稱為 PCR擴增實驗室 , 就是進（jìn）行聚（jù）合酶鏈反應的實驗室（shì）場所，廣泛應用於（yú）生物學各個領域。例如艾滋病、乙型肝炎、禽（qín）疫病、癌（ái）基因的檢測和診斷、DNA指紋、個體識別、親子鑒定、法醫物證、動植物檢疫、動物及其衍生產品檢測、動物飼料（liào）、化（huà）妝（zhuāng）品、食品衛生檢測、轉（zhuǎn）基因作物與轉基因微生物檢（jiǎn）測等。
一、工藝要求
1、PCR實驗室 , 或稱為 PCR擴增（zēng）實驗室 , 就是進（jìn）行聚合酶鏈反應的實（shí）驗室場（chǎng）所，廣泛應用於生物學各個領域。例（lì）如艾滋病、乙（yǐ）型肝炎、禽（qín）疫（yì）病、癌基因的檢（jiǎn）測和診斷、DNA指紋、個體識別、親子鑒定、法醫物證、動植物檢疫、動物及其衍生產品檢測、動物飼料、化妝品、食品（pǐn）衛生（shēng）檢測、轉基因作物與轉基因微生物檢測等。該區域主要完成試劑和主反應混合（hé）液的（de）儲存、配製（zhì）和封裝工作 。所有運送到該區域（yù）的試劑和材料不應（yīng）經過其他區域，試劑和原材（cái）料應在本區內儲存和製備（bèi）。本區域（yù）的氣壓應相對外界保持正壓（yā）。由於該區域有（yǒu）多（duō）種試劑，“安全" 應是平麵設計首要考慮因（yīn）素。平麵設計時應保持通風流暢 、逃生暢通。首先實驗台布置在房間的兩側，中間的過道全部通（tōng）向走廊便於疏散。同時根據國際人體工程學的（de）標準，實驗台與實驗台通道設計為 1500mm，中間的通道可滿足兩邊坐人中間（jiān）過人的要求。
2、標本製備區（qū）
該區域的功能是樣本的（de）保存 、核酸提取和貯存 、樣本（běn）加入（rù）擴增反應管和測（cè）定DNA 的（de）合成 。樣本應（yīng）直接運送至該區並（bìng）儲存在本區（qū）內，不得經過其他區域。對於氣流壓力的控製，由於在本區內加樣操作可能產（chǎn）生氣溶膠，為避免氣（qì）溶膠擴散出去對外界造成汙染，本區應對外界保持負壓。從（cóng）質量控製的（de）角度而言，本區相對於擴增反應混合物配製和擴增區以及擴增產物分析區為（wéi）正壓，以避免從鄰近區進入本區的（de）氣溶膠汙染。但當涉病原微生物時，標本製備區GB 19489-2008《實驗室生物安全通用安全》對BSL-2實驗（yàn）室的各項安全（quán）要求，此（cǐ）時要本（běn）區相對於擴增區為（wéi）負壓，故涉及病原微生（shēng）物操（cāo）作時 , 在綜合考慮（lǜ）質量控製（zhì）、生物安全因素的（de）前提下，整體上標本製備區與擴增區的壓力應持平。即均（jun1）為（wéi）負壓（yā），兩（liǎng）個相鄰（lín）房間之間的負壓值基本相當。
3、擴增區
該區域的功能是DNA擴增和擴增片段的（de）測（cè）定。此外反應混合液 (來自試劑貯存和（hé）製備（bèi）區) 製備成反（fǎn）應混合液和已製（zhì）備的DNA模板 (來自標（biāo）本製備區) 的加入等也可在本區（qū）內進行。對於氣流壓力的控製， 相對於鄰近區域為負壓，以避免氣溶膠從本區漏（lòu）出。為避免氣溶膠所致的汙染，應盡（jìn）量減少在本區內不必要的走動。個別操作如加樣等應在超淨台內進（jìn）行。
4、產物分析區
該區域的功能是擴增產物的分（fèn）析。該區（qū）域可能會用到（dào）某些可致基因突變的有（yǒu）毒（dú）物質，應特別注意（yì）實（shí）驗人員的安全防護。對（duì）於對於氣流壓力的控製，該區域是PCR實驗的最後（hòu）一 步（bù），壓力應為zui低，相對（duì）於鄰近區域為負負壓，以避免氣溶膠從（cóng）本區漏出。為避免氣溶膠所致的汙染，應盡量減少在本區內不必要（yào）的走動。
二、平麵布局
1、功能分區要求
PCR實驗室原則上分為（wéi）試劑準備區、樣品製備區、擴增區和擴增產物分析區四個工作區域， 各工作區域應設緩衝間，工作區與緩（huǎn）衝間宜安（ān）裝連鎖裝置。不同功能的工作區應是分（fèn）隔獨立的，各工（gōng）作（zuò）區有（yǒu）明顯的標誌，不能直通，如果緊密相連，需安裝物品（pǐn）傳遞窗。
前兩（liǎng）區為擴增前，後兩區為擴增後區，擴增前區與擴增後區應嚴格分開（kāi）。
實驗材料 、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等，隻能從擴增前區流向擴增後區，即從試劑準備（bèi）區、樣品製備區、擴增區輸送到擴展（zhǎn）產（chǎn）物分析（xī）區，不得逆向流動。實驗室的氣流也應從擴（kuò）增前區流向（xiàng）擴增後區（qū），不（bú）得逆向流動。
試劑準備區 、擴增區 、擴增產物分析區，空間可以相對小一（yī）些。
樣品製備區要放置生物安全櫃（guì）和（hé）低溫冰箱，空間應大一些。通常（cháng）每間麵積為15~20m² , 整個區域麵積為60~80m² 。
PCR實驗室區域的設置並不是一成不變的 , 以下（xià）幾種情況需要說明：
(1) 如果樣本在（zài）擴增之前需要粉碎處理 , 則需要增加一個區域用於樣品的粉碎。
(2) 如果采（cǎi）用實時熒光PCR法，則擴增區和分析區可以合並（bìng）為一個區。
(3) 如果采用全自動化PCR分析儀，則標本製備區、擴增區和分析區可以合（hé）並為一個區（qū）。
2、緩衝間的設置
影響空（kōng）氣在不同區域之（zhī）間傳播汙染的（de）主要因素包括壓差、溫差以及門的（de）卷吸作用和人的裹帶作用（yòng）。壓差是空氣從高壓一側通（tōng）過門窗縫隙流向低壓一側時的阻力，其隔離作用限製於房間的門、窗等開口（kǒu）處於關閉狀態時候，一旦門打開（kāi），兩個房間之間的壓差將瞬間降（jiàng）低為零。因此（cǐ）壓差屬於（yú）靜態隔離的一種措施，在開門（mén）狀態下（xià）起不（bú）到隔離（lí）作用。門開啟時（shí）， 由於溫差（chà）、門的卷吸作用和人的裹帶作用 , 會引起短時間（jiān）、大風量（liàng）的室內外（wài）空氣交換，產生交叉汙染。
由以上分析可知，實（shí）驗室門開（kāi）啟時，必然會產生實驗室內（nèi）空氣的外泄。因此，對（duì）於PCR實驗室，分（fèn）區之前應分別設置獨立的緩衝間，保證緩衝間的門（mén）不同（tóng）時（shí）開啟。同時可進（jìn）一步設計合理的壓差梯度控製措施進行全過（guò）程的（de）“動態隔離 "。在建築設施上（shàng），緩衝間是阻隔室內外空氣（qì）流通即交叉汙染的首要措施。因此 , 各工作區均需設置緩衝間。
當前位置：