無菌室浮（fú）遊菌（jun1）測試標準

1、目的
建（jiàn）立無菌室（shì）浮遊菌測試標（biāo）準（zhǔn）操作程序，規範無菌室浮遊菌的檢測。
2、範圍
適用於無菌（jun1）室（包括潔淨工作台）浮遊（yóu）菌（jun1）的測試和環境驗證。
3、職責（zé）
QA、QC人（rén）員遵照（zhào）執行。
4、內容
4.1參考標準：GB/T 16293-2010
4.2測試（shì）方法
本（běn）測試方法為計數濃度法，即通過（guò）收集懸浮在空（kōng）氣中（zhōng）的生物性粒子於專門的培養基（選擇能證（zhèng）實其能夠支持微生物生長的（de）培養基），經若幹時間和（hé）適宜的生長（zhǎng）條件讓（ràng）其繁殖到可見的菌落計數（shù），以判定該無菌室的微生物濃（nóng）度。
4.3測試儀器、輔助設備和培養（yǎng）基
浮（fú）遊菌采樣器、培養皿（選用與儀器相適應的培（péi）養（yǎng）皿）、培（péi）養（yǎng）基、恒溫培養箱（xiāng）、高壓蒸汽滅菌器。
4.4測試狀態及（jí）測試時間
4.4.1靜態和動態兩種狀態均可進（jìn）行測試（shì），靜態測試時，室內測試人員不得多於2人。
4.4.2在靜態a測試時，單向流（liú）無菌室（區），測試在淨化空調係統正常運行時間不（bú）少於10分鍾後開始；非單（dān）向流無菌室（區），測試（shì）在淨化空調（diào）係統正常（cháng）運行不少於30分鍾後（hòu）開始。在靜態b測試時，單向流無菌室（區），測試在生產操作（zuò）人員撤離現場（chǎng）並經過10分（fèn）鍾自淨後開始；非單向流無菌室（區），測試在生產操作人員撤離現場並經過20分鍾自淨後開始。
4.5采樣點（diǎn）的確定
4.5.1zui少采樣點數目見表1，每次zui小采樣量見表2。
表（biǎo）1 zui少采樣點數目：

表2 zui小采樣量（liàng）：

4.5.2采樣點位置布置宜力求均勻，避免采樣點在局（jú）部區域過於稀疏，采樣點按照《潔（jié）淨區環（huán）境（jìng）監控管理規程（chéng）》附件×××車間潔淨度監測采樣點布局圖（tú）的要求布置，每個采樣點一般采樣一次（cì）。
4.5.3工作區（qū）采樣點位置離地（dì）0.8m~1.5m左右（略高於工（gōng）作麵），送風口測點位（wèi）置離開送風（fēng）麵30cm左右（yòu），可在關鍵設備（bèi）或關（guān）鍵工作活（huó）動範圍處增加測點。
4.6測試準備
4.6.1采樣器在進入被測區域前先清潔表麵，然後用75%酒精消毒一遍或（huò）存放於被測區域內，與被測試區域一起消毒（用於*無菌室的采樣器（qì）必須（xū）預先放在被測房間內）。
4.6.2A/B級區（qū）采用一次性培養皿，其（qí）它（tā）區域按無菌操作要（yào）求，在中檢室潔淨工作台上提前製備培（péi）養備用（將滅菌後的培養基用水浴溶解，冷卻至約50-60℃，Φ90mm培（péi）養皿每個傾注約20ml培養基，Φ150mm培每個傾注（zhù）約30ml培養基），培養皿加蓋後在室溫下放至凝固。自製好的培養皿（mǐn）在無菌室內存放不超過48小時，2~8℃保存的培養皿一般不超過1周，一次（cì）性培養皿在標（biāo）注的有（yǒu）效（xiào）期內使用，過期不得使用。
4.6.3A/B級（jí）區使用的培（péi）養皿在區域消毒前一次性傳入，隨（suí）環境一起消毒，在消毒液取用間（jiān）架子上暫存，在有效期內使用。若需臨時傳入，則必須（xū）在前一天臭氧消毒前通過C級與B級（jí）傳遞窗傳入B級區進行臭氧消毒，第二天使用。傳入前表麵（miàn）也必須用75%酒精擦拭。其它區域用培養皿按物品傳入要求當天傳入使用。
4.6.4采（cǎi）樣前，先用75%酒精清洗采樣器的頂蓋、轉盤以及罩子的內外麵（FKC型（xíng）浮（fú）遊空氣塵菌采樣器用酒（jiǔ）精（jīng）清洗采樣頭）。
4.6.5測試具體操（cāo）作見浮遊菌采樣器標準操作程序或浮遊空氣塵菌采樣器標（biāo）準操作程序。
4.6.6采樣結束後，蓋上培養皿蓋子，在培養皿上標注所有信息（包括產品批號，放（fàng）置位（wèi）置等），將培（péi）養皿（mǐn）用適宜的方式捆紮，倒置（zhì）於30~35℃恒溫培養箱中培養，培養時間不少於2天。
4.6.7培養結束後逐個檢查培養皿，用肉眼對培（péi）養皿（mǐn）上所有的菌落直接計數、標記，然後用5~10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養皿上有2個或2個（gè）以上的菌落重（chóng）疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數（shù）。
4.7測試記錄應包（bāo）含以下內容
4.7.1被測試區域名稱、測試日期、測試依據、測試者姓名、測試儀器及測試方法的描述，測試（shì）時（shí）所采（cǎi）用的狀態和（hé）室內測試（shì）人員數，采樣點數（shù）目（mù），測試次數、采樣流（liú）量，測試結果（包括所有統計（jì）計算（suàn）資料（liào））等。
4.7.2若為動態測試，還應記錄現（xiàn）場操作人員數量，現場設（shè）備運轉情況等。
4.8結果計算
4.8.1用計數方法得出各（gè）個培養皿的菌落數。
4.8.2每個測點（diǎn）的浮遊菌（jun1）平（píng）均（jun1）濃度計算按下式進行。
4.9結果評（píng）定
4.9.1每（měi）個測點的浮遊菌平均（jun1）濃度必須低於所選定評定標準（zhǔn）中的界限。
4.9.2在靜態測試時，若某（mǒu）測點的浮遊菌平均菌濃度超過評定標準，則應重新采樣兩次，兩（liǎng）次測試結果（guǒ）均合格才能判為符合。
4.9.3若有超過規定者，必須及時與生（shēng）產部門，對該區域進行消毒（dú）或其它處理，然後重新測試至合格。
4.10日常監控
4.10.1浮遊菌日常監控設糾偏限度和警（jǐng）戒限度（dù）（限度範圍及取樣頻次見《潔淨區環境監控管理規程》），以保證無菌室（區）的微（wēi）生物濃度受到控製，定期檢測以檢查微生物負荷以及消（xiāo）毒劑的效力，並作傾向分析。靜態和動態的監控都可以（yǐ）采用該方法。
4.10.2對於浮遊菌的取樣頻次，如果（guǒ）出現下（xià）列（liè）情況應考慮修改，在評估以下情況（kuàng）後，也應確定其他項（xiàng）目的檢測頻次。
（1）連續超過糾偏限度和警戒限度（dù）；
（2）停工時間比預計延長；
（3）關鍵區域內發（fā）現有汙染存在；
（4）在生產期間，空氣淨化係統進行任何重大的維（wéi）修；
（5）日常操（cāo）作記錄反映出傾向性的數據；
（6）消毒規程的改變；
（7）引起生物汙染（rǎn）的事故等；
（8）當生產設備有重大維修或增（zēng）加設備時；
（9）當無菌室（區）結構或區域分布有重大變動時（shí）。
4.11注意事項（xiàng）
4.11.1JYQ-Ⅱ型浮遊菌（jun1）采樣器經消毒後先不放入培養皿（mǐn），開啟浮（fú）遊菌采樣器，使儀器中的殘餘消毒劑蒸發，時間不少於5分鍾，檢查流量並根據采樣（yàng）量調整設（shè）定采樣時間。
4.11.2單向流無菌室（區）或送（sòng）風口，采樣器采樣口朝向應正對氣流方向，非單向流無（wú）菌室（區），采樣口向上。
4.11.3測試時必須穿著（zhe）與被測區域潔淨度級別要求相適應並經高壓滅菌後的無菌服。
4.11.4布（bù）置采樣點時，至少應盡量避開塵粒較集中（zhōng）的回風口。
4.11.5采樣結束，需用75%酒精（jīng）噴射采樣器（qì）罩子的（de）內壁和轉盤（FKC型浮遊空氣塵菌采樣器噴（pēn）射采樣頭和保（bǎo）護蓋）。
4.11.6應采取一切措施防止采樣過程（chéng）的汙（wū）染和其他可能對樣本的汙染。
4.11.7每批（pī）培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否汙染，可（kě）每批選定3隻培養（yǎng）皿作為對照培養；培養皿（mǐn）在用於檢測時，為避（bì）免培養皿（mǐn）運輸或搬動過程造成的影響（xiǎng），宜同時進行對照試驗，每次或每個區域取1個對照（zhào）皿，與（yǔ）采樣皿（mǐn）同法操作但不需暴露（lù）采（cǎi）樣，然後與采樣後的培養皿一起放入培養箱中培養，結果應無菌落生長。
4.11.8采（cǎi）樣前應仔細檢（jiǎn）查每個培養皿的質量，如發現變質、破損或汙染的應（yīng）剔除（chú）。
4.11.9由（yóu）於細菌種類繁多，差別甚大，計數（shù）時一般用透射光（guāng）於於培養皿背麵或正麵仔細觀察，不要漏計培養皿邊（biān）緣生長的菌落，並須注意細菌菌落（luò）或培養基沉澱（diàn）物的區別，必要時用顯（xiǎn）微鏡鑒（jiàn）別。
4.11.10必須定期對恒溫（wēn）培養箱進行校驗。