潔淨（jìng）室的檢測--微生物測定

空氣中懸浮微生物的測定有多種，但其測定的基（jī）本過程都是（shì）經過捕集-培養-計數的（de）過程。目前普遍（biàn）采用的是浮遊菌（jun1）和沉降菌的測試方法。浮（fú）遊菌測試方法是通過收集懸浮在空氣中的生物粒子（zǐ）於專門的培養基平皿，經若幹時間在適宜的（de）生（shēng）長條件下讓其（qí）繁殖到可見的菌落進行計數，以此來判定潔淨環境內單（dān）位體積（jī）空氣中的活微生物數。沉降菌測試方法是通過自然沉（chén）降原理收集在空氣中的生物粒子於培養基平（píng）皿，經若幹時間，在適宜的條（tiáo）件下讓其繁殖到可見的菌落進行（háng）計（jì）數，以平板培養皿中（zhōng）的菌落數來判定潔淨環境內的活（huó）微生物數。
1、檢測要求
（1）檢測前（qián），被測潔淨室的運行狀態必須在正常狀態，其溫度、濕度、風量、風壓及風速必（bì）須在控製的規（guī）定值內；被測試的潔淨室(區（qū）)應已進行過消（xiāo）毒；同時，潔淨室的測試狀態（tài）必（bì）須（xū）符合生產工藝的要求，並在測試報（bào）告中注明（míng）其測試狀態。
（2）測試人員必須穿戴（dài）潔（jié）淨服，而且一般不得超過兩個人（rén）。
（3）淨化空調係統正常運轉時間，對單向（xiàng）流如5級（100級）潔淨室或層流工作台不得少於10min；對非單向流如7級（10000級）、 8級（100000級）的潔淨室不得少於30min。
（4）采（cǎi）樣點的（de）布置及要求：
a.浮遊（yóu）菌測試時，采樣點位置可以與（yǔ）懸浮粒子測試點相同。工作區測點位（wèi）置距地麵0.8～1.5m（略高於工作麵）；送風口測點位置距送風麵30cm左右。根據需要可在關鍵設備或關鍵工作活動（dòng）範圍處（chù）增加測點。采樣點（diǎn）的布置應力求均勻，避免局部區域過於集中或稀（xī）疏。
b.沉降菌測試（shì）時，采樣點的位置可以與（yǔ）懸浮（fú）粒子測試點相同。工作區采樣點的位置距地麵0.8～1.5m（略高於工（gōng）作麵）；根據需要可在關鍵設備或關鍵工作活（huó）動範圍處增加測點，采樣點的布（bù）置應力求均（jun1）勻。
2、檢測方法
（1）浮遊菌的檢測方法
1）首（shǒu）先應對測試儀器、培養皿表麵（miàn）進行嚴格消（xiāo）毒。采樣器進入被測房（fáng）間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用於100級潔淨室的采樣器宜一直放（fàng）在被測房間內；用消毒劑擦（cā）淨培養皿的（de）外表麵，把采樣器的頂蓋、轉盤以及罩子（zǐ）內外消毒幹淨（jìng）；采（cǎi）樣（yàng）口及采樣管在使用前必（bì）須高（gāo）溫滅菌。
2）采樣者應穿戴與被測潔淨室相應的潔淨服，在轉盤上放入或調換培養皿前（qián），雙手要用消毒劑消毒。
3）開（kāi）動真空泵抽氣，使儀器（qì）中的殘餘消毒劑蒸（zhēng）發， 時間（jiān）不少於5min，並調好流（liú）量（liàng）、轉盤轉速。
4）關閉真空泵，放入培養皿，蓋好蓋子後調節采樣器。
5）置采樣口於采樣點後，依次開啟采樣器、真空泵，轉動定時器（qì），根據采樣量選定采（cǎi）樣時間。
6）全部采（cǎi）樣結束後，將培養皿倒置於30～35℃恒溫培養（yǎng）箱中培養，時間不少於45h。
7）用肉眼直接計數，然後用（yòng）5～10倍放大鏡檢查，是否有遺漏。若平板上（shàng）有兩個或兩個（gè）以上的菌落重疊，分辨時仍以兩個或兩個以上菌落計數。
（2）沉降菌檢測方（fāng）法
1）首先也是（shì）對測試儀器（qì）、培（péi）養皿表麵進行嚴格消毒（dú）滅菌，在37℃恒溫培養箱中培（péi）養48h觀察，確信無菌（jun1）後方可使用。
2）一般用Ø90mm的沉降平皿，注人20mL培養基，放在（zài）測點處，開蓋暴露30min，將培養皿蓋蓋上（shàng）後倒置。然後在30～35℃恒溫培養箱中經48h培養為肉眼計菌落數，並記錄生成的菌落數（shù）CFU，然後用5～10 倍（bèi）放大鏡檢（jiǎn）查，是否有遺漏。若培養皿上有兩個或（huò）兩個以上的菌落重（chóng）疊，分辨時仍以兩個或（huò）兩個以上菌落計數。
3、檢測儀器
（1）浮遊菌測試儀器
1）儀器設備主要有采樣器、真空抽氣泵、培養皿、恒溫培養箱等。
2）微生物采樣器有多種形式，主（zhǔ）要有固體撞擊式采樣（yàng）器、離心式（shì）空氣微生物采樣器、氣旋式微生（shēng）物氣溶膠采樣器、液體衝擊式微生物氣溶膠采樣（yàng）器、過濾式微（wēi）生（shēng）物氣（qì）溶膠采樣器、大容量靜電沉降采樣器等。采樣器的選擇（zé）應考（kǎo）慮采（cǎi）樣器的靈（líng）敏度、采樣效率，以及有（yǒu）利（lì）於微生物的（de）存活、易於分析粒子（zǐ）大小、 易於（yú）操作和使用方便等因素。浮遊菌采樣器一般采用狹縫式采樣器和離心式采樣器。
3）狹縫式采樣器(撞擊式采樣器)。各類狹（xiá）縫（féng）式采樣器工作原理都相同。將采集的微生物氣溶膠噴射到緩（huǎn）慢旋（xuán）轉（zhuǎn）的撞擊（jī）板或固體培養基（jī）表麵（miàn）上，具有足夠大運量的粒（lì）子撞擊到收集板上，而較小粒子（zǐ）由於慣性小在氣流夾攜下流出。每種型號的撞（zhuàng）擊式采樣器都有其自身的收集效率。例如國產的THK-201型采（cǎi）樣器，屬於固體慣性撞擊式，打開電源後用真空抽氣（qì），懸浮於空氣中的帶菌粒子被吸入采樣（yàng）頭的篩孔（kǒng）篩，該采樣器的特點是采樣頭篩孔隙是可（kě）調的，當空隙調小時，可用於采集較（jiào）小（xiǎo）粒子；若要采集大粒子時（shí），可（kě）將（jiāng）空隙調大，從而增大了采樣器的應用範圍（wéi）。
4）離心式采樣器基（jī）於離心撞擊原理（lǐ），當采樣器通電後，借助於蝸殼內的（de）葉輪高速旋轉，能把至少40cm距離以內被測的帶菌空氣吸入，在離（lí）心力（lì）的作用（yòng）下，空氣中的活微生物粒子加速撞擊到的培養基條（tiáo）上，采樣後的培養基條從蝸殼中取出，經過恒溫、定（dìng）時培養，形成菌落，然後進行菌落計數。國內研製生產的JWC-1型采樣器便是一種性能較好的離心（xīn）式空氣微生物采樣器，采樣量為40L/min。
（2）沉（chén）降菌測試所用的儀器設備
主要（yào）有高壓消毒鍋、恒溫（wēn）培養箱、培養皿。培（péi）養皿一般（bān）采用Ø90mm*15mm的硼矽酸玻璃培養皿，培養基采用普通肉瓊（qióng）脂培養基或《中華人民共和國藥典》認可的其他培養基。
4、合格標準
國內外有關浮遊菌測定的標準：
 
國內外有關沉降菌測定的標準（zhǔn）：