微生物汙染的檢測采樣

1、生物汙染的檢測采樣儀器的（de）選擇（zé）原則
（1）了解（jiě）與分析所需（xū）采樣的活性粒子的類型（xíng）
由於不同微生物自身的粒徑不等，生存形態各異（yì），有效的載體（tǐ）不同等等，這些區別與差異都會影響采樣方法和采樣儀器的選擇。因此，必須有針對性的選擇采樣儀器方能獲得可靠的測量（liàng）值，在這一點上與空氣中懸浮微粒的檢測相比顯得更為複雜。
（2）該活性粒子對采樣方法的敏（mǐn）感性
例如某些活粒子凝塊易被衝擊采樣器的衝擊力所破碎，造（zào）成活性粒子采樣的機械損失而影響（xiǎng）采樣效率。對（duì）於此類（lèi）活性（xìng）粒子（zǐ）則宜避免選用這類采樣方法。
（3）活粒子的預（yù）期濃度
這也是需要（yào）根據經（jīng）驗（yàn）作出預判斷（duàn）的一個方麵，例如活粒子濃度很高時，在某種儀器的小采（cǎi）樣量條件下獲得的采樣結果，也會因菌落（luò）重（chóng）疊，難於計數，而造成較大的檢測誤差。
（4）危險區的可達性
所（suǒ）設定的生物汙染控製危（wēi）險區往往不適宜采樣或采樣的風險較大。例如，靠近手術切口上方空氣的含菌濃度是空氣環境對感染率產生影（yǐng）響的敏感部位，而恰恰（qià）在這個部位進行檢測采樣存在較（jiào）多的困難與隱患，可能影響、幹擾醫（yī）護（hù）人員的（de）操作，存在較大的醫療事故（gù）風險。對於手術中（zhōng）的這個生物汙染控製（zhì）的危險區域，采樣儀器往往是不能進入（rù）的，即存在不可達性的問題。基於這種情況，就要安排其它合適（shì）的檢測采樣位置，而該部位的測值應是能反映危險區域（yù）生物汙染控製效果的。
（5）極低程（chéng）度生物汙染的檢測能力（lì）
對於這種情況要事前判定所選采樣儀器是否能反映真實情況。譬如（rú）在ISO 5級以上的潔淨（jìng）室中，由於空氣潔淨度（dù）很高，懸浮微粒（lì）稀少，如用沉降平皿采樣，則其平皿數或沉降麵（miàn）積和暴露時間都要大量增加，才有可能滿足檢（jiǎn）測概率（lǜ）的要求（qiú）。否則（zé），按常（cháng）規方法（fǎ）操作（zuò），平皿的讀值都（dōu）可能為“0”，但這並未反映低濃度汙染的（de）真實情況。因此，在對極低程度生物汙染環境選擇檢測儀器和方（fāng）法時，要格外重視其檢測能力。如（rú）果使用（yòng）其它帶吸氣動力源的微生物采樣裝置時，其（qí）采樣空氣量、采樣持續時間也應與一般（bān）汙染環境不同，要依（yī）據采樣概率來分（fèn）析與計算必要的采樣（yàng）空氣量，再決定所選儀器的單位時間采樣量和采樣時間。
（6）采樣儀器對所監測工藝或環境的影響
這也是選擇檢測儀器和檢測方法時必須考慮的問題。例如某些（xiē）微（wēi）生物采樣器噪聲較大（dà），如果用於手術中的微生物采樣，就（jiù）要（yào）顧忌其是否影響、幹擾醫護人員的正常（cháng）操作。
2、采樣計劃的製定
采樣計劃首先應該明確（què）所檢（jiǎn）測、監測的生物汙染（rǎn）控製區的潔淨度、生物（wù）汙染控製水平，這些指標是（shì）依據工作人（rén）員的安全、保護工藝和保證產品的質量，以（yǐ）及保障環境的需要來確定的。這些指標通常由業主、使用單位提出。
（1）采（cǎi）樣計劃
采樣計劃必須以正式文件的形式確定（dìng）下來，以（yǐ）作為生物汙染檢（jiǎn）測（cè）工作所依據的證明文件。此文件經業主、承包商或檢測單位共同認可，並符（fú）合國內、的相關規範。這個有關采樣計劃的證明文件（jiàn），對生物汙染數據的準確（què）評價與解釋是*的。采（cǎi）樣計劃中應明確檢測（cè）時該區域所處的狀態。一（yī）般情況下，生物汙染檢測是在動態條件（jiàn）下，甚至選擇在該（gāi）區域活動頻（pín）繁的時間段（duàn）。當然，靜態條件下的檢測也是需要的，它能對潔淨室的設（shè）計與效能提供有用的信息，並可作為運行中（zhōng）比對（duì）的原始資料。采樣計劃（huá）文件中（zhōng）應就檢測狀（zhuàng）況予以明確規定。
（2）采樣點的選擇與數量
除均（jun1）布測點外，危險區域通常宜增點測點。例如生物潔淨手術室的手術（shù）床周圍，一般都會額（é）外增設（shè）測點。
1）沉（chén）降菌
我國國家標準GB/T 16293-1996《醫藥工業潔淨室（區）沉降菌的測試方（fāng）法》（2006版的《醫（yī）藥工業潔淨（jìng）廠（chǎng）房（fáng）設計規範》仍遵循此測試方法）中關於測點的規定如下（xià）表：
沉降法的（de）少采樣點數目（mù）

注：表（biǎo）中的麵積，對（duì）於單向流潔（jié）淨室，是指送風麵積；對於非單向（xiàng）流潔淨室是指房間的麵積
表（biǎo）中的潔淨度級（jí）別，依原有（yǒu）習慣按美國聯邦標準209的分級（jí）劃分，表中的英製100級相當ISO 5級，10000級相當於ISO 7級，100000級相當於ISO 8級。
表中所規定的沉降菌測點數與住房和城鄉建設部行業標準JGJ 71-90 《潔淨室施工及驗收規（guī）範》所規定的空氣中懸（xuán）浮微粒采樣的低采樣點數是*一致（zhì）的。
工（gōng）作區采樣點的位置（zhì），一般略高於工作麵，即離地0.8～1.5m。
在關鍵（jiàn）設備或關鍵活（huó）動範圍（wéi）處可增加采樣點。
根據ISO 14644-1的規定（dìng），空氣中懸浮微粒測定（dìng）的采樣點數較（jiào）之大為削（xuē）減，至於沉降菌的測點數是否（fǒu）參照現行標準（zhǔn）執行，尚有待研究決（jué）定。尤其是在動態（tài）條件下按國內現行標準進行沉降菌的（de）監測，表中所列（liè）測點數（shù）對於麵積較大的高級別生物潔淨室，在實施時困（kùn）難（nán）是較（jiào）大的。
2）浮遊菌
我國國家標準GB/T 16294-1996《醫藥工業潔淨室（區（qū））浮遊菌的測試方法》中（2006版的《醫藥工業潔淨廠房設計規範》仍遵（zūn）循此測試方法）關於測點的規定如下表所列，表（biǎo）中區別驗證與監測兩種不同（tóng）情況給出了不同的（de）采樣點數。
浮遊菌測試的少采樣點（diǎn）數目

注：1、表中的麵積，對於（yú）100級的單向流潔淨室，包括層流工作（zuò）台，指的是送風口表（biǎo）麵（miàn）積；對於10000級、100000級的非單向流潔淨室，指的是房間麵積。
    2、日常監測的采樣點數目由（yóu）生產工藝的關鍵操作點來確定。
浮遊菌采樣測（cè）點（diǎn）的位置一般（bān）離地麵0.8～1.5m。送風口測點位置一般距出風麵0.3m左右，測點位（wèi）置也（yě）宜離開汙染較集中的回風口1m以（yǐ）上。對於關鍵設備與（yǔ）關鍵工作活動範圍處宜增加（jiā）測點數。
3）采樣點（diǎn）均布方法
對於均布采樣點的（de）布置方法，GB/T 16293-1996和GB/T 16294-1996還提供了一些測點布置圖供參考：

國家標準GB 50333-2002《醫院潔淨手術（shù）部建（jiàn）築（zhù）技術規範》關於不同級別（bié）手術室監測時的測點（diǎn）數與位置如下表所列。無論（lùn）是塵粒數、浮遊菌、沉降（jiàng）菌采樣，均按下表執行。

手術室麵積一般（bān）在20～60m²範圍，通常是高級別的麵積較大，低級別的麵積稍小。以單位麵積的測點數推算，上表所列采樣點數與國內現行的其它（tā）標準基本（běn）一（yī）致。
3、采樣（yàng）量的要求
采樣量偏（piān）小可能提供不了具有代（dài）表性的結果，過（guò）大的采樣量又將增加工（gōng）作量，降低工作效（xiào）率，國標GB/T 16293、GB/T16294分別作出了一些規定，可供參考。
（1）沉降菌
GB/T16294-1996對於沉降菌的培養皿數（shù）有如下規定：在滿足（zú）所規定的少測點數的同時，還宜滿足所（suǒ）規定的少培養（yǎng）皿數，如下表所列（liè）：
國家標準GB 50333-2002《醫（yī）院潔淨手術部建築技術規範》對沉降菌測試少培養皿數規定如下表所列：

（2）浮遊菌
GB/T 16293-1996關於浮遊菌檢測時，根據日常監測與環境（jìng）驗證的不同情況，給出了每次小采樣量的規定值，如下表所列：

國家標準GB 50333-2002《醫院潔淨手術部（bù）建築技術（shù）規範》對懸浮微粒（lì）采樣量的規定是（shì）：每（měi）次采樣的小采樣（yàng）量100級區（qū）域為5.66L，以下各（gè）級區域為2.83L。關於浮遊（yóu）菌的測試，GB 50333-2002的規定如下表所列：

4、檢測（cè）與監測的頻率
生物汙（wū）染受（shòu）控環境的檢測與潔淨室的（de）檢測相類似，在建設與常規運行過程中應有以下的檢測計劃。
（1）竣（jun4）工驗收（shōu）檢測；
（2）生（shēng）物潔淨室綜合性能評價；
（3）定期（qī）監測。
此外，發生以下情況時需要額（é）外安排檢（jiǎn）測（cè）或調整監測頻率，其中有些情況也是生物汙染（rǎn）受控環境所*的。
（1）生物汙染受控環境連續超過報警值或動作值，需立（lì）即進行幹預，以查明原因（yīn）並采取糾正（zhèng）措（cuò）施。
（2）生物潔淨室長期停運（yùn）之後，在正（zhèng）式啟用之前（qián）需進行檢測。
（3）在危險區檢測到傳染媒介時。
（4）對通風空調淨化係（xì）統進行重大維護工作之後。
（5）對生（shēng）物潔（jié）淨環境產生影響的工藝（yì）變（biàn）更之後。
（6）改變清潔或消毒方法（fǎ）之後（hòu）。
（7）可能（néng）會（huì）造成生物汙（wū）染（rǎn）的意外事故發生之後。
5、樣品（pǐn）處理與培（péi）養
這也是生（shēng）物汙染受控環境有別於工業潔淨室（ICR）檢測的主要方麵。截止目前（qián），生物汙染（rǎn）受控（kòng）環境普遍采用的檢測方法，其采樣（yàng）都要經過一定時（shí）間的培養才能（néng）得出結果。正因為如此（cǐ），對生物潔淨（jìng）室的（de）采樣要格（gé）外細心，避（bì）免差錯（cuò），通常要注意以下幾個方麵（miàn）：
（1）樣品標（biāo）識
1）每個采樣的樣品都應包含以下信息，以便在獲得培養數據後，為正確分析檢測結果提供可靠的依據。
2）采集日期和時間（jiān）。
3）采集當時進行的活動以及偏（piān）離采樣計劃之處。
4）采樣人（rén）。
5）培養基類型。
（2）樣品處理方法
樣（yàng）品從各采樣點收集後，要運送到集中培養處，在運輸或處理過程中不應影（yǐng）響所采集到的微生物的活性與數（shù）量，以下方麵應予以注意：
1）運輸和儲存的條件是（shì）否適宜，進入正式培養前的時間（jiān）是否偏長（zhǎng）。
2）中和介質和滲透稀釋液（yè）的正確使用。
（3）樣品培養（yǎng）
培養（yǎng）基是按照所選定的微生物種類，並根據采樣環境、采樣方法及所（suǒ）使用的設備來確（què）定的，不同微生物及培養基的（de）培養條件有所不同。
為了保證采樣與培養的（de）結果有效，培養（yǎng）基的品質十（shí）分關鍵。除了其組分、性能的（de）可靠外，培養基容器外表麵的潔（jié）淨度十分重要，通（tōng）常需要二（èr）層或三層包裝。如有（yǒu）可能，在選擇培養基的培養溫度和時間（jiān）時，要考慮對預期采集到的微生物有利的生長條件。