藥品生產企業微生物實（shí）驗（yàn）室設計探討

1、前言
藥品檢驗實驗室通常（cháng）包含理化實驗室和微生物實驗室兩部分；理化實驗室運用物（wù）理、化學的（de）方法對生產（chǎn）用的原輔料、包裝材料、中間體及成品等進行鑒別、含量測定等分析和檢驗，其結果作為檢品是否符合法定要（yào）求和企業內部質量標準的依據。
微生物實驗室一般（bān）具（jù）有以下功能：
①按《中國藥典》要求，進行微生物檢驗方法的驗證、無菌檢查、微生物限度檢查、抗生素效（xiào）價的微生物（wù）檢定、青黴素酶及其活力測定。
②按現行《藥品生產質量管理規範》的要求，對醫藥工業潔淨室的潔淨度進行微生物測定，對無菌生產區環境日常動態監（jiān）測以及生產過程中其他需要進行微生（shēng）物檢測的地方，如（rú）對無菌過濾器（qì）的（de）驗證、環境及設備消毒效果的驗證、滅菌效果的驗證、無菌藥品包裝密封性驗證中微生物挑戰性試驗等。
③細菌內毒素檢查、注射劑的不溶性微粒檢查，這類檢查雖（suī）不是檢查（chá）微生（shēng）物，但它們對檢查環境有較高（gāo）的要求，通常設在（zài）微生物實驗室。
2、微生物實驗室設計的（de）有關要求
《藥品生產質量管理（lǐ）規範》要求藥品生（shēng）產企業應負責藥品（pǐn）生產全過（guò）程的質量（liàng）管理和檢驗，並配備與藥品生產規模、品種（zhǒng）、檢驗要求相適應的人員、場（chǎng）所、儀器、設備（bèi）。在進行微生物實驗室的設計時，應（yīng）了解檢驗流程、過程（chéng）性質、有關標準規範的規定等，結合藥品生產企業生產品種、檢驗工作量的大小合理布置相應的微生物檢驗功能間。在藥品的微生物學（xué）檢驗中，為了保證檢（jiǎn）測結（jié）果的準確、可靠，針對（duì）微生物學檢（jiǎn）驗產生影響的幾種（zhǒng）因（yīn）素需要采取相應的措施，通常為以下幾種：
①藥（yào）品本身的抑菌性或藥品中防腐劑的抑菌性。它們會掩蓋無菌藥品已受汙染的事實或造（zào）成（chéng）低於實際汙染水平的菌檢（jiǎn）結果。通常采用生長比較法，在實際檢驗條件下，通過比較對照接種（zhǒng）試驗（yàn）菌或陽性菌在有無供試品的狀態下的生長情況，來驗證供試品在該檢驗方法下的抑菌性。
②標準菌（jun1）種（試驗菌或陽性菌（jun1））製備與傳代、種類（lèi）及生長狀態需符合現行《中（zhōng）國藥典》要求。
③培養基的促菌生長能力：培養基應具（jù）備廣譜性，有助於（yú）檢品中所有（yǒu）存活微生物（wù）的生長。通過接種不同試驗菌並觀（guān）察它們的生長狀態，進行培養基靈敏度驗證試驗。
④檢驗器具，如過濾係（xì）統的（de）濾器、濾膜性（xìng）質、材質等性能，淋（lín）洗液、稀釋劑、培養基（jī）的無菌性及操作程序等，通常進（jìn）行（háng）陰性對照試（shì）驗來檢驗其影響。
⑤培養條件（溫度、濕度及需氧或厭氧）及檢測（cè）環境應符合相關要求。
2.1無菌檢查實驗室
2.1.1用途（tú）
用（yòng）於（yú）檢查藥典要求無菌（jun1）的藥品、醫療器具、原（yuán）料、輔料（liào）及（jí）其他品種是否無菌。
2.1.2《中國藥典》對無菌檢查實驗室要求（qiú）
無菌檢查應（yīng）在環境潔淨度10000級下的局部潔淨度100級的單向流空氣區域內或隔離係統中進行，其全過程必須嚴（yán）格遵（zūn）守無菌操（cāo）作，防止微生物汙染。單向流空氣（qì）區、工作台麵及環境應定期按《醫藥工業潔淨室（區）懸浮粒子、浮遊菌和沉降菌的測試方（fāng）法》的現行國家（jiā）標準進行潔淨度驗證。隔離係統按相關的要（yào）求進行（háng）驗證，其內部環境的潔淨度須符合無菌檢查的要求。
2.2微生物限度（dù）檢查實驗室
2.2.1用途
用於檢查非規定滅菌製劑及其原料、輔料受微生物汙染的程度。檢查項目包括細菌數、黴菌數、酵母菌數及控製菌檢查。
2.2.2《中國藥典》對微（wēi）生物限度檢查實驗室的要求
微（wēi）生（shēng）物限度（dù）檢查應在環境潔淨度（dù）10000級下的局部潔（jié）淨度100級的單向流空氣區域內進行。檢驗全過程必須嚴格遵守無菌操（cāo）作，防止再汙染。單向流（liú）空氣（qì）區（qū）域、工作台麵及（jí）環（huán）境應定期按《醫藥工業潔淨室（區）懸浮粒子、浮遊菌和沉降菌的（de）測試（shì）方法》的現行國家標準進行潔淨度驗證。
2.3抗生素效價的微生物檢定（dìng）室
2.3.1用途
在適宜條件下，根據量反應平行線原理（lǐ）設計（jì），通（tōng）過檢測抗生素對微生（shēng）物的抑（yì）製作（zuò）用，計算抗生素活性（效價）。
2.3.2《中國藥典》對抗生素效價的微生物檢（jiǎn）定室的環境潔淨度未有明確規定要（yào）求
在國家食品藥品監督管理局2000年9月頒發的《藥品檢驗所（suǒ）實驗室質量管（guǎn）理規範（試行）》中第十八條中規定有“抗生素微生物檢定實驗室分為半無菌操作（zuò）間和緩衝間。半（bàn）無菌操作間設有紫外（wài）線燈，操作台宜穩固，並保持水平（píng）。實驗室內應光線明亮，並有控製溫（wēn）度、濕度的設（shè）備（bèi）”。通常按（àn）潔淨度100000級設計。抗生素效價的微生物檢定（dìng）實驗所用燒杯、漏鬥、移液管、容量瓶、滴管、小鋼管等器皿應與其他（tā）器皿分開洗（xǐ）滌，檢定用平板與其他培養基平板也應分開（kāi）洗滌，防止抗生素對其他（tā）微生物培養的汙染（rǎn）。
2.4細菌（jun1）內毒（dú）素（sù）檢查用室（shì）
2.4.1用途
利用鱟試劑來檢（jiǎn）測或（huò）量化由革蘭陰性菌（jun1）產生的細菌內（nèi）毒素，以判斷供試品中（zhōng）細菌內毒（dú）素的（de）*是否符合規定。適用於某些不能（néng）用家兔進行熱原檢測的品種，如放射性藥劑腫瘤抑製劑等，因為（wéi）這些製劑具有細胞毒性而有一定的生物效應。目前一般認為特別適（shì）用於生（shēng）產過程（chéng）中的熱原控製，因為該檢查法操作（zuò）簡單，實驗費用少，結果迅速（sù）可得。但該檢查法對革蘭陰性菌以外的（de）內毒素不夠敏感，故尚不能代（dài）替家兔熱原法。
2.4.2《中國藥典（diǎn）》中（zhōng）要求
進行細菌內毒素含量測定試驗所用的器皿需經處（chù）理，以去除（chú）可能存在的外源性內毒（dú）素，試驗操作過程應防止微生物的汙染，在清淨環境中進行，在層流工作（zuò）台內（nèi）操作。實驗前，須用肥皂洗手，用75%乙醇棉球消毒。但《中國藥典（diǎn）》中未（wèi）對細菌內毒（dú）素檢查用室的環境潔淨度明確規定要求。一般來（lái）說細菌內毒素（sù）檢查用室為半無菌操（cāo）作間：室內（nèi）設滅菌紫外（wài）燈，潔淨度要求一般為100000級。也有一些藥廠為了節省能耗而將其設置為（wéi）一般環境。
2.5不溶性微粒檢查用室
2.5.1用途
在可見異物檢查符合規定後，用以檢查溶（róng）液型靜脈用注射（shè）劑中不溶性微粒的大小和數量。
2.5.2《中國藥（yào）典（diǎn）》要求
試驗操作環境應不得引入微粒，測（cè）定前的操作應在（zài）層流淨化台下進行。玻璃儀器和（hé）其他所需的用品（pǐn）應潔淨無微粒，本法（fǎ）所用微粒檢查用（yòng）水（或溶劑）使用前須經不大於1.0um的微孔濾膜濾（lǜ）過。
2.5.3因《中國（guó）藥典》要求注射用水須進行細菌內毒素檢測，因此溶液（yè）型靜脈用注（zhù）射劑的（de）不溶性微粒檢查可（kě）與細菌內毒素檢查用室設成（chéng）一間，不用專設一（yī）室，配置相應的層流淨化工作台。
3、其它（tā）問（wèn）題
3.1陽性接種室
（1）微（wēi）生物檢驗離不開對標準菌種及所檢測的菌種進行各種處理，如（rú）培養基的靈敏度檢查、無菌檢查及微生（shēng）物限度檢查方法的驗證、陽性對照、抗生素效價的微（wēi）生物檢定時菌（jun1）種及菌懸液製備、轉接種等（děng），這些活（huó）動要（yào）直接處理微生物菌種，在一定條件下，許多種類都是病原（yuán）菌，因此有（yǒu）關微生物暴露性操（cāo）作活動盡可（kě）能在（zài）生（shēng）物安全櫃內進行。所有染菌物品、培養物均應經高壓滅菌處理後再（zài）清（qīng）洗。
（2）無菌檢查及微生物限度檢查中陽性對照菌液加入含供試品的培養基的操作（zuò），不能（néng）在（zài）檢測供試品的無菌室或淨化台上進行，以免汙染供試品及操作環境。可設置一間陽性接種室進行上述操作。以前（qián）有的將其（qí）設置為一般環境；有的根本就未專設此室。《中國藥典》（2005年版）頒發後，目前許多人認為將其設置為（wéi）潔淨（jìng）度10000級，設置單獨的人淨、物淨係統。
3.2無菌室
《中國藥（yào）典》要求無菌藥品（pǐn）的無菌性檢查室、非無菌藥品的微生物限度檢查室的環境潔淨度都為10000級（jí）（局部潔淨（jìng）度100級），通常都稱（chēng）為（wéi）無菌室；若某（mǒu）藥廠既生（shēng）產無菌藥品（pǐn），也生（shēng）產非無菌藥品，為防止非無菌藥品供試品對（duì）無菌藥品的無菌性檢查的汙染（rǎn），有兩種方式：
①如果同時進行這兩（liǎng）類藥品的檢驗（yàn），將這兩種無菌室分開設（shè）置二套，使用各自（zì）的人淨、物淨（jìng）係統（tǒng）。此種（zhǒng）方式無菌（jun1）室利用（yòng）率不高。
②通常隻設一套（tào）無菌室，分期進行這兩類藥品的檢驗，合理安排檢驗規程、嚴格（gé）操作並（bìng）經驗證，確保不對無（wú）菌藥品的無菌性檢查產生汙染。
3.3隔離係統
《中國藥典》無菌檢查法中被為可（kě）使用的設（shè）施，它能提供並保持與外界（jiè）環境隔離的百級潔淨度的操作環（huán）境。隔離操作器所（suǒ）處環境的級別取決於它們的設計及其應用。美國藥典並不要求（qiú）它安裝在潔（jié）淨區/室，但應控製無關（guān）人員進入其所處房間；歐盟GMP則建議應將它放置於100000級的環境中。采用隔離（lí）操作技術能大限度（dù）降低操（cāo）作（zuò）人員和外界環境（jìng）對潔淨空間的影響。它既（jì）可用於無菌實驗，又可用於其他需要高潔淨度的多（duō）種研究和實驗。但隔離（lí）操作器的性能與操（cāo）作程序的驗證尤為重要，隔離用袖管/手套係統（tǒng）應進（jìn）行（háng）常（cháng）規監測，這包（bāo）括經常進行必要（yào）的檢漏試驗。隔離係（xì）統的諸多優勢如潔淨區域的隔離化、自動化（huà）、小型（xíng）化等將使其（qí）成為無菌區的發展未來。
3.4培養室
用來放置培養各類微生物生長的細菌培養箱和真菌（jun1）培養箱（xiāng）。大多數將其設置（zhì）為一般環境；也有的將（jiāng）其潔淨度設置為（wéi）100000級。設計時根據藥廠相關部（bù）門的要求進行。