藥品生產企業微（wēi）生物實驗室設計

1、前言
藥品檢驗實（shí）驗室（shì）通常包含（hán）理化（huà）實（shí）驗室和微生（shēng）物實驗室兩部分；理化實（shí）驗室運用物理、化學的（de）方法對生產用的（de）原輔料、包裝材料、中間體及成品等（děng）進行鑒別、含量測定等（děng）分析和檢驗，其結果作為檢品是否符合法定要求和企業內部質量標準的依據。
微生物實驗室一般（bān）具有以（yǐ）下（xià）功能：
①按《中國藥典》[1]要求，進行微生物檢驗（yàn）方（fāng）法的驗證、無菌（jun1）檢（jiǎn）查（chá）、微生物限度（dù）檢查（chá）、抗生素效價的微生物檢定、青黴素酶及其（qí）活力測定。
②按現行《藥品生產質量管理規（guī）範》的要求，對醫藥工業（yè）潔淨室的潔（jié）淨度進行微生物測定，對無菌生（shēng）產區環境日常動態監測以及（jí）生產過程（chéng）中其他需要進（jìn）行微生（shēng）物檢測（cè）的地方，如對（duì）無菌過濾器的驗證、環境（jìng）及（jí）設備消毒效果的驗證、滅菌效果的驗（yàn）證、無菌藥品包裝密封性驗證中微生物挑（tiāo）戰性試驗等。
③細菌內毒素檢查、注射劑的不溶（róng）性微粒檢（jiǎn）查，這類（lèi）檢查雖不是（shì）檢查微生物（wù），但它們對檢查環境有較高的（de）要求，通常設在微生物（wù）實驗室。
2、微生物實驗室設計的有關要求
《藥品生（shēng）產質（zhì）量管理規範》[2]要（yào）求藥品生（shēng）產企業應負責藥品生產全過程的（de）質量管理和（hé）檢驗，並（bìng）配備與藥品生產規模、品種、檢驗要求相適應的人員、場所、儀器、設備。在進行微生物實（shí）驗室的設計時，應了解檢驗流程、過程性（xìng）質、有關標準規範的規定等（děng），結合藥品生產企業生產品種、檢（jiǎn）驗工作量的大小合（hé）理布置相應（yīng）的微生物檢驗（yàn）功能間。
在藥（yào）品的微生物學檢驗中，為了保證檢測（cè）結果的準確、可靠，針（zhēn）對微生（shēng）物學檢驗產生（shēng）影響的幾種因素需要采取相應的（de）措施，通常（cháng）為以下幾種：
①藥品本身的抑菌性或藥品（pǐn）中防腐劑的抑菌性。它們會掩蓋無（wú）菌藥品已受汙染的事實或造（zào）成低（dī）於實際汙染水平的（de）菌（jun1）檢結果。通常采用生（shēng）長比較法，在實際檢驗條件（jiàn）下，通過（guò）比較對照接種試驗菌或陽性（xìng）菌在有無供試品的狀態下的生長情況，來驗證供試（shì）品在該檢驗方法下（xià）的抑菌性。
②標準菌種（試驗菌或陽性菌）製備與傳代、種類及生長（zhǎng）狀態需符合現行《中國藥典》要求。
③培養基的促菌（jun1）生長能力：培養基（jī）應具（jù）備（bèi）廣譜性，有助於檢品中所有（yǒu）存活微生物的生長。通過接種不同試驗菌並觀察它們的生（shēng）長狀態，進行培養基靈敏度驗證試驗。
④檢驗器（qì）具，如過濾係統的濾（lǜ）器（qì）、濾膜性質、材質等性能，淋洗液、稀（xī）釋劑（jì）、培養基的無菌性及操作程序等，通（tōng）常進行陰性對照試驗來（lái）檢驗其影響。
⑤培養條件（溫度、濕度及需氧或厭氧）及檢測環境應符合相關要求（qiú）。
2.1無（wú）菌檢查實驗室
2.1.1用途
用於檢查藥典要求無菌的藥品、醫療（liáo）器具、原料（liào）、輔料及其他品種是否無菌。
2.1.2《中（zhōng）國藥典》對（duì）無菌檢（jiǎn）查實驗室要求
無菌檢查應（yīng）在環境潔淨度10 000級下的局部潔淨度100級的單向（xiàng）流空氣區域內或隔離係統中進行，其全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止微生物汙染。單向流空氣區（qū）、工作台麵及環（huán）境（jìng）應定期按《醫藥工業潔淨室（區（qū））懸浮（fú）粒子、浮遊菌和沉（chén）降菌的測試方法》的現行國家標準進行潔淨（jìng）度驗證。隔離係統按（àn）相（xiàng）關的要（yào）求進行驗證，其內部環境的潔淨度須符合無菌檢查的要求。
2.2微生（shēng）物限度檢（jiǎn）查實驗室
2.2.1用途
用於檢查非規定滅菌製（zhì）劑及其原料、輔料受微生物汙染的程度。檢查（chá）項目包括細菌數、黴菌數、酵母菌數及控製菌（jun1）檢查。
2.2.2《中國藥典（diǎn）》
對微（wēi）生物限度檢查實驗室的（de）要求
微生物限度檢查應在環境潔淨度10 000級下的局部潔淨度100級的單向流空氣區域內進（jìn）行（háng）。檢驗全（quán）過程必須嚴格遵守無菌操作，防止再汙染。單向流空氣區域、工作台麵及環境應定（dìng）期按《醫藥工業潔淨室（區（qū））懸浮粒子、浮遊菌和沉（chén）降菌的測試（shì）方法》的（de）現行（háng）國家標準進行（háng）潔淨度驗證（zhèng）。
2.3抗生素效價的微生物檢定室
2.3.1用（yòng）途
在適宜條件下，根據量反應平行線原理設（shè）計，通過檢（jiǎn）測抗生素對微（wēi）生物的（de）抑（yì）製作用，計算抗生素活性（效（xiào）價）。
2.3.2《中國（guó）藥典》[1]對抗（kàng）生素效價的微生物檢定室的（de）環境潔淨度未有明確規定要求
在國家食品藥品監督（dū）管（guǎn）理局2000年9月（yuè）頒發的（de）《藥品檢驗所實（shí）驗室質量管（guǎn）理（lǐ）規範（試行）》中第十八條中規定有“抗生素微生物檢定實驗室分為半無菌操作間和緩衝間。半無菌操作間設有紫外線燈，操作台宜穩固，並保持水平。實驗室內應光線明亮，並有控製溫度、濕度的設備”。通常按潔淨度100 000級（jí）設計。
抗生（shēng）素效價的微生物檢定實驗所用（yòng）燒杯、漏（lòu）鬥、移液管、容量瓶、滴管（guǎn）、小鋼管等器皿應與其他（tā）器皿分開洗滌，檢定用平板與（yǔ）其他培養基平板也應分開洗滌，防止抗生素對其他微生物培（péi）養的汙染。
2.4細菌內毒素檢（jiǎn）查用室
2.4.1用途
利用鱟試劑來檢測或量化（huà）由革蘭陰性菌產生的細菌內毒素（sù），以判斷供試品中細菌內毒素的*是否符合（hé）規定。適用於某些不能用家兔（tù）進行熱原檢測（cè）的品種，如放（fàng）射性藥劑腫（zhǒng）瘤抑製劑（jì）等，因為這（zhè）些製劑具有細胞毒性而有一定的生物效應（yīng）。目前一（yī）般認為特別適（shì）用（yòng）於生產過程中的熱原控製，因為該（gāi）檢（jiǎn）查法（fǎ）操作（zuò）簡單（dān），實驗（yàn）費用少，結果迅速可得。但該檢查法對革蘭陰性菌以外的內毒素不夠敏感，故尚不能代替家兔（tù）熱（rè）原法。
2.4.2《中國藥典》中要求
進行細菌內毒素含量測定試驗所用的器皿需經處理，以去除可能存在的外源性內毒素，試驗操作過程應防止微（wēi）生物的汙染，在清淨環境中進行，在層流工作台內操作。實驗前，須用肥皂洗手，用75%乙醇（用叔丁醇代替乙醇）棉（mián）球消毒。但《中國藥典》中未對細（xì）菌內毒素檢（jiǎn）查用室的環境潔淨度明確規定要求。一般（bān）來說細（xì）菌內毒素檢查用室為半無菌操作間：室內設滅菌紫外燈，潔淨度要求一般為100000級。也有一（yī）些藥廠為了節省能耗而將其設置為一般（bān）環境。
2.5不溶性微粒（lì）檢查用室
2.5.1用途
在可見異物檢查符合規定後（hòu），用以檢查（chá）溶液型靜脈用注射劑中不（bú）溶（róng）性微粒的大小（xiǎo）和數量。
2.5.2《中國藥典》[1]要求
試驗操作環境應不得引入微粒，測定前（qián）的操作應在層流淨化台下進行。玻璃儀器和其他所需的用品應潔淨無微粒，本法所用微粒檢查用（yòng）水（或（huò）溶劑）使用前須經不大於1.0 um的（de）微孔濾膜濾過。
2.5.3因《中國藥典（diǎn）》要求注射用水須進行細菌內毒（dú）素檢（jiǎn）測（cè），因此溶液型靜脈用注射劑的不（bú）溶性微（wēi）粒檢查可與細菌內毒（dú）素檢查用室（shì）設成一間，不用專設一室，配置相應的層流淨化（huà）台。
3、相關問題及案例
3.1陽性接種室
（1）微生物檢驗離不開對標準菌種及所檢測的菌（jun1）種進行各種處理（lǐ），如培養基的靈敏（mǐn）度（dù）檢查、無菌檢查及微生物（wù）限度檢查方法的驗證、陽性對照（zhào）、抗（kàng）生素效價的微生物檢定時菌種及菌懸液製備（bèi）、轉接種等，這些活動要直接處理微生物（wù）菌（jun1）種，在一定條件下，許（xǔ）多（duō）種類（lèi）都是病原菌，因此有關（guān）微（wēi）生物暴（bào）露性操作活動盡可能在生物（wù）安全（quán）櫃內進行（háng）。所有染菌物品、培養物均應（yīng）經高壓滅菌處理後再清洗。
（2）無菌檢查及微生物限（xiàn）度檢（jiǎn）查中陽性對照菌（jun1）液加入含（hán）供試（shì）品的培養基的操（cāo）作，不能（néng）在檢測供（gòng）試品的無菌室或淨（jìng）化台上進（jìn）行，以免汙染供試品及操作環境。可設置一間陽性接種室進（jìn）行上述操作。以前（qián）有的將其設置為一般環境；有的根本（běn）就未專設此室。《中國藥（yào）典（diǎn）》（2005年版）頒發後，目前（qián）許多人認為將其設置為潔淨度10 000級，設置單獨的人淨、物淨係統。
3.2無菌室
《中國藥（yào）典》要求無菌藥品（pǐn）的無菌性檢查（chá）室、非無菌藥品的微生物限度檢查室的環境潔淨度都為（wéi）10 000級（局部潔（jié）淨度100級），通常都稱為無菌室；若某藥廠既（jì）生產無菌藥品，也生產（chǎn）非無菌藥品，為防止非無菌藥（yào）品供試品對無菌藥品的（de）無菌性檢查的汙染，有兩種方式：
①如果同（tóng）時進行這兩類藥品的檢驗，將這兩種無菌室分開設（shè）置二套，使用（yòng）各自的（de）人淨、物淨係統。此種方式無菌室利（lì）用率不高。
②通常隻設一套無菌室，分期進行這兩類藥品的（de）檢驗，合理安排檢驗規（guī）程、嚴格操作並經驗證，確保不對無菌藥（yào）品的無菌性檢查產生（shēng）汙染（rǎn）。
3.3隔離係統
《中國藥（yào）典》[1]無菌檢查法中被為可使用的設施，它能提供並保持與（yǔ）外界環境隔離的百（bǎi）級（jí）潔淨度的操作環境。隔離操作器所處環境的級（jí）別取決於它們的設計及其應用（yòng）。美國藥典並不要求它安裝在潔淨區/室，但應控製無關人員進入其所處房間；歐盟GMP則建議應將它放置於100 000級（jí）的環境中。采用隔離操作技（jì）術能zui大限度降低操作人員和外界（jiè）環境對潔淨空間的影響（xiǎng）。它既可用於無菌實驗，又可用於（yú）其他需（xū）要高潔（jié）淨度的（de）多種研究和實驗。但隔離操作器的（de）性能與操作程序的驗證尤為重要，隔離用袖管/手（shǒu）套係（xì）統應進行常規監測，這包括經常（cháng）進（jìn）行必要的檢漏試驗。隔離係統的諸多（duō）優勢如潔淨區域（yù）的隔離化、自動化、小型化（huà）等將使其成為無菌區的發（fā）展未來。
3.4培養室
用（yòng）來放置培養各類微生物（wù）生長的（de）細菌培養箱和真菌培養箱。大多數將其設置為（wéi）一（yī）般環境；也有的將其潔淨度設置為100 000級。設計時（shí）根據藥廠相關部門的要求進行。