微生物無塵車間（無菌室）的使（shǐ）用和（hé）管理

無塵車間（無菌室）是微生物檢測的重要場（chǎng）所與zui基本（běn）的設施，因此它的設（shè）計要按國家標準《潔淨廠房設（shè）計（jì）規範》、國家藥品監督管理（lǐ）局頒發的《藥品檢驗所實驗室質量管理規範（試行）》中第十八條規定執行。微生（shēng）物實驗（yàn）室無塵車（chē）間的施工、安裝、驗收應按國家行業標準《無塵車間（jiān）的施工及驗收規範》執行。對於微生物檢測（cè）工作者和使用管理者來（lái）講，更（gèng）大量的工作是進行正常管理到日（rì）常的使用。無塵車間（無菌室）的（de）標準要符合GMP潔淨度標準要求。
1、無塵車間（無菌室）要（yào）符（fú）合規（guī）範要求
無菌室應采光良好、避免潮濕、遠離廁所（suǒ）及汙染區。麵積一（yī）般不超過10m2，不（bú）小（xiǎo）於（yú）5m2；高度不超過2.4m。由1—2個緩衝間、操作間組成（chéng）（操作間和緩衝間的門不應直（zhí）對），操作間和緩（huǎn）衝間之間應具備滅菌功能的樣品傳遞箱。在緩衝（chōng）間內應有洗手（shǒu）盆（pén）、毛巾、無菌衣褲（kù）放置架及掛鉤、拖鞋等，不應放置（zhì）培養箱和其他雜物；無菌室內應六麵光滑平整（zhěng），能耐受清洗消毒。牆（qiáng）壁與地麵、天花（huā）板連接處應呈凹弧形，無縫隙，不留死角（jiǎo）。操作間內不應安裝下水道。
無菌操作室應具有空氣除菌過濾的單（dān）向流空氣裝置，操（cāo）作區潔淨度100級或放置同等（děng）級別的超（chāo）淨工作台，室內溫度控（kòng）製18—26℃，相對濕度45%—65%。緩衝間及操作室內均應設置能達到空氣消毒效果的紫外燈或其他適（shì）宜的消毒裝置（zhì），空氣潔淨級別不同的相（xiàng）鄰（lín）房間之間的靜壓差應大於5Pa，無（wú）塵車間（區）與室外大氣的靜（jìng）壓差大於10Pa。無菌室內的照明燈（dēng）應嵌裝在天花板內，室內光（guāng）照應（yīng）分布均勻，光照度不低於300lx。緩衝間和操作（zuò）間（jiān）所設置的紫外（wài）線殺菌燈（2—2.5w/m3），應定期檢查輻射強度，要求在操作（zuò）麵（miàn）上達40uw/m2。不符合要求的（de）紫外殺菌（jun1）燈應及時更換（huàn）。
2、建立使用（yòng）登記（jì）製度
在（zài）登記冊中可設置以下項目內容：如使用日期、時間、使用（yòng）人、設備運行狀況、溫度、濕度、潔淨度狀態（沉降菌數、浮遊菌數、塵（chén）埃粒子數）、報修原因、報修結果、清潔工作（台麵、地麵（miàn）、牆麵、天花板、傳遞窗、門把手）、消毒液名稱等。
3、建立使用標準操作規範（SOP）並嚴格管理
（1）規定淨化係統使運轉時間要求每（měi）次實驗前應開啟淨化係統使運轉至少1h以上，同時開啟淨化（huà）台和紫（zǐ）外燈（dēng）。
（2）物品進入無塵車間（無菌室）基本要求：凡進入無塵車間（jiān）（無（wú）菌室）的物品必須先在*緩衝間內對外部表麵用消毒劑消毒滅菌，再（zài）經物（wù）流緩（huǎn）衝間、傳遞窗（chuāng）1h以上，及無菌空氣吹幹後送（sòng）入無菌室。注意帶纖維、易發塵物品不得帶進淨化實驗室。無菌室內固定物品不得任意搬出（chū）。
（3）人員進入無塵車間（無菌室）要求：實驗人員（yuán）進入無塵車間（無菌室）不得化妝、帶手表、戒指等首飾；不得吃東（dōng）西、嚼口香糖。應清潔手後進入（rù）*緩衝間更衣，同時換上消毒隔離拖（tuō）鞋，脫去外衣，用消（xiāo）毒液消毒雙手後戴上無菌手套，換（huàn）上無菌連衣帽（不得讓頭發（fā）、衣等（děng）暴露在外麵），戴上（shàng）無菌口罩。然後戴上第二副無菌（jun1）手套，在進（jìn）入第二緩衝間（jiān）時換第二雙消毒隔（gé）離（lí）拖鞋。再經（jīng）風淋室30s風淋後進入無菌室。
（4）溫濕度觀（guān）察要（yào）求：觀察溫度計、濕度計上顯示的溫濕度是否在規定的範圍內（nèi），並作為實驗原始數據記錄在案。如發現問題應及（jí）時尋找原因，及時報修和（hé）及時報告實驗室主管（guǎn），並將報修原因和結果記錄歸檔。
（5）沉降菌落計數與浮遊（yóu）菌測定要求：在每次實驗同時（shí），對（duì）操作室和層流台做微生物沉（chén）降菌落計（jì）數，將結果記錄在（zài）使用登記本上，並（bìng）作為實驗環境原始數據記錄（lù）在實驗（yàn）報告上（shàng）。每周1次，或在（zài）無菌（jun1）檢查等必要時（shí），在每次實驗同時對操作室和（hé）淨化台進行浮遊菌測定，將結果記錄在使用登記本上，並（bìng）作為實驗環（huán）境原始數據記錄在實驗報告上。
（6）消毒要求：無菌（jun1）室每周和每次操作前用0.1%新潔爾滅或2%甲酚液或其他適宜消毒液（yè）（常用消毒劑的品種有：5—20倍稀釋的碘伏水溶液、0.1%新潔爾滅溶液、1：50的84消（xiāo）毒液、75%乙醇溶液、3%碘酒溶液、5%石炭酸（來蘇兒）消（xiāo）毒溶液、2%戊二醛（quán）水溶（róng）液、尼（ní）泊（bó）金乙醇消毒液（處方：對羥基苯甲酸甲（jiǎ）酯21.5g；對羥基苯甲酸（suān）丙酯8.6g，75%乙醇10ml）等，所用的消毒劑品種與使用要（yào）進行有效性驗證方可使用，並定期更換消毒劑的品種）擦拭操（cāo）作（zuò）台及可能汙染的死角，方法是（shì）用無菌紗布浸漬消毒溶液清潔超淨台（tái）的（de）整個（gè）內表麵、頂（dǐng）麵、及無菌室、人流、物流、緩衝間的地板、傳遞窗（chuāng）、門把（bǎ）手。清潔消毒（dú）程序應從內向外，從高潔淨區到低潔淨區。逐步（bù）向外退出（chū）潔淨區域。然後開啟（qǐ）無菌空氣過濾器及紫外燈（dēng）殺菌1—2h，以殺滅存留微生物。在每次（cì）操作完畢，同樣用上述消毒溶液擦拭工作台麵，除去室內濕氣，用紫外燈殺菌30min。
（7）其他要求：如遇停電應立即停止實驗（yàn），離開（kāi）無菌（jun1）室，關閉所有電閘。重新進入無菌室前至少開啟機房運轉1h以（yǐ）上。
4、潔淨度檢查的要求與方法
無菌室在消毒處理後（hòu），無菌試驗前及操作過（guò）程中需檢查空氣中（zhōng）菌落（luò）數，以此來判斷無菌室是否達到規定的潔淨度，常有（yǒu）沉降菌和浮遊菌測定方法。
（1）沉降菌檢測方法（fǎ）及標準：以無菌方式將3個（gè）營（yíng）養瓊脂平板帶入無菌操作室，在操作區台麵左、中、右各放1個；打（dǎ）開平（píng）板蓋，在空氣中暴露30min後將平板蓋好，置32.5℃士2.5℃培養48h，取出檢查，3個平板上生長的（de）菌落數平均（jun1）小於1個。
（2）浮遊菌檢測方法（fǎ）及標準：用專門的采樣器，宜采用撞擊法機（jī）製的采樣器，一般采用狹縫式或（huò）離心式采樣器，並配有流量計（jì）和定（dìng）時器，嚴格按儀器說明書的要求操作並定時校檢，采樣器和培養皿進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，使用的培養基為營養瓊脂培養基或藥（yào）典認（rèn）可的其他培養基。使用時，先開（kāi）動真空泵（bèng）抽氣，時間不（bú）少於5min，調節流量（liàng）、轉盤、轉速。關閉真空泵，放入培養皿，蓋上采樣器蓋子後調節縫隙高度。置采樣口（kǒu）采樣點後，依次（cì）開啟采樣器、真空泵，轉動定時（shí）器，根據采樣量設定采樣時間。全部（bù）采樣結束後，將培養皿置32.5℃士2.5培養48h，取出檢（jiǎn）查，浮遊菌落數（shù）平（píng）均（jun1）不得超過5個/m3。每批培養基應選定3隻培養皿做對照培養。無（wú）菌操作台麵或超淨（jìng）工作台還應定期檢測（cè）其懸（xuán）浮粒子，應達到100級（一般用塵埃粒子計數儀）檢測，並根據（jù）無菌狀況必要時置（zhì）換過濾器
5、定期進行潔淨度再驗證（zhèng）
定期（qī）（每季（jì）度、半年、1年）或當無塵（chén）車間（jiān）設施發生重大改變時，要按國家標準GB/T16292-16294-1996《醫藥工業無塵車間（區）懸浮粒子、浮遊菌和沉降菌的測試方法》進行潔淨度再（zài）驗證，以確保潔淨度符合規定，保存驗證原始記錄（lù），定期歸檔保存，並（bìng）將驗證結果記錄在無菌室使用登記冊上，作為實驗環境原始依據及趨（qū）勢分（fèn）析資料。並定期對無塵車間的（de）環境檢測數據（jù）進行趨（qū）勢分析（xī）和評估，根據評估結果（guǒ），了解（jiě）無（wú）塵車間設施環境質（zhì）量的穩定狀況及變（biàn）化趨勢，決（jué）定是否有必要修訂相應的警戒和糾偏限度。
6、定（dìng）期更換新的紫外燈管
定期更換（huàn）淨化係統的初（chū）效、中（zhōng）效、（至少每年1次），以確保淨化係統的功能持續有效（xiào）；更換新的紫外燈管，以確保（bǎo）紫外燈管滅菌（jun1）持續有效。並同時在使用登記本上做好更（gèng）換記錄，定期歸檔保存，至少（shǎo）2年1次，或按潔淨度驗證實際情況（kuàng）。
7、使用過程中應盡可能減少人員的走動或活動
平時實驗室內應盡可能減少（shǎo）人員的走動或活動，同向無塵車間的門要關閉或安裝自動閉門器使其保持關閉狀態。
8、潔淨度不符合規定時（shí）立即停止使用
發現（xiàn）潔淨度不符合規定時，應立即停止使用，尋找原因，*清潔、必須經潔淨度再驗證（zhèng）符合規定後，才再使用，並同時將（jiāng）情況記錄在（zài）無菌室使用登記冊上，定期歸檔保（bǎo）存。
9、對進入的外來人員或維修人員進（jìn）行指導和監督
非微生物室檢驗人員不得進入無塵車間（無菌室），對（duì）必須進入的外來人（rén）員或維修人員要進行指（zhǐ）導（dǎo）和監督。
10、無塵車間（無菌室）的日常管理
建立安全衛生值日製度，一旦發現通（tōng）風係統、牆壁、天花板、地麵、門窗及公用介質係統等設施有損壞現象，要及時報（bào）告並采取相應的修複措施，並保存記錄及時歸（guī）檔。從無塵車間（無菌室）環境（jìng）中檢測到的微生物應能鑒別至屬（shǔ）或種，保留鑒別實驗原始記錄及菌種，作為無菌生（shēng）產（chǎn）、無菌檢查無塵車間（jiān）環境質量、消（xiāo）毒劑有效性評估及（jí）汙染源調查的依據。